С новыми технологиями —
к высоким стандартам
КАЛИБРОВОЧНЫЕ СЕТКИ
:: Определение концентрации фибриногена

Определение концентрации фибриногена

Определение концентрации фибриногена в клинической практике проводят для оценки системы гемостаза, острофазного ответа и риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Референтный диапазон его концентрации составляет 2,0-4,0 г/л и практически не зависит от пола и возраста, а при тяжелых бактериальных инфекциях, травмах его концентрация может превышать 10 г/л.

Для количественного определения концентрации фибриногена в условиях клинико-диагностических лабораторий наиболее применим метод Клаусса в основе которого лежит логарифмическая зависимость концентрации фибриногена в разведенной исследуемой плазме от lg времени образования сгустка после добавления к плазме тромбина высокой активности.

Перед регистрацией времени образования фибринового сгустка исследуемую плазму первоначально разводят буферным раствором в 10 раз, поскольку   только в условиях высокой активности тромбина и низких концентраций фибриногена наблюдается линейная зависимость концентрации от времени образования фибрина. Такое разведение плазмы крови позволяет определять концентрацию фибриногена ориентировочно в диапазоне до 5,0 г/л. Этап разведения образца плазмы может отрицательно влиять на воспроизводимость метода.

Исключение этапа предварительного разведения пробы представляется целесообразным с позиции контроля качества исследований, и реализовано в модифицированном методе Клаусса используемого новой тест-системой «МультиТех-Фибриноген» производства фирмы « Технология –Стандарт». Модифицированный метод Клаусса   позволяет исследовать концентрацию фибриногена в более широком диапазоне и исключить влияние этапа разведения пробы на правильность и воспроизводимость.

Метод может быть применен для определения концентрации фибриногена на коагулометрах с оптическим, оптико-механическим и механическим принципом регистрации образования сгустка.

Ниже приводятся результаты апробации и сравнения новой тест-системы с наборами реагентов для определения концентрации фибриногена других производителей.

Принцип метода заключается в определении времени свертывания цитратной плазмы избытком тромбина. Концентрация фибриногена определяется по калибровочной кривой, построенной в билогарифмической системе координат.

Подготовка реагентов к работе   и проведение исследования приведены в инструкции к набору реагентов «МультиТех-Фибриноген».

Оценка результатов: Время свертывания исследуемого образца плазмы составляет 5-100 с, в зависимости от концентрации фибриногена и типа коагулометра. Диапазон определения концентрации фибриногена без дополнительного разведения составляет 0,9-10,0 г/л. Если результаты определения близки к 0,9 г/л или меньше (отсутствие регистрации сгустка), концентрацию фибриногена следует определить классическим методом Clauss набором реагентов «Тех-фибриноген-тест» (кат. № 094 или кат. № 324) или аналогичным с разведением плазмы 1:5. Концентрация фибриногена у здоровых людей находится в диапазоне от 2,0 до 4,0 г/л.

Результаты сравнительного тестирования набора реагентов «МультиТех-Фибриноген» с близкими по назначению наборами и различных коагулометрах

Калибровка тест-системы «МультиТех-Фибриноген» выполнена на коагулометрах с разным принципом регистрации времени образования сгустка с использованием набора «МультиТех-Калибратор», состоящего из 5 лиофилизированных образцов   калибровочных плазм с концентрацией фибриногена 1.25, 2.2, 3.2, 5.5, 8.0 г/л. Калибровочные кривые, построенные для разных приборов, представлены на рис. Зависимость концентрации фибриногена   от времени образования сгустка в билогарифмической системе координат приближается к прямой линии на всей области тестирования.

image002.gif

Рис. Калибровочные кривые, полученные при использовании набора «МультиТех-Фибриноген» на разных коагулометрах

Сравнение разных тест-систем проведено с использованием контрольной плазмы с концентрациями фибриногена   0,6;   1, 1;   2,3;   3,4;   5,6;   8,4 г/л . В таблице 1   приведены данные по стабильности определения КФ в плазме крови наборами реагентов разных фирм при проведении исследования по методу Клаусса с предварительным разведением плазмы 1:10, и использовании цельной плазмы, при проведении исследования по модифицированному методу.

ВАЖНО! Применение модифицированного метода Клаусса позволяет расширить диапазон уверенного определения КФ для разных типов коагулометров, особенно в области высоких концентраций, требующих дополнительного разведения пробы при классическом варианте метода.

Таблица 1.
Результаты определения КФ тест-системами разных производителей

г/л

Fibrinigen Assay

Fibrinogen Reagent

Опти-Фибриноген

Фибриноген- тест

Тех-Фибриноген-тест

Multifibren U

МультиТех-Фибриноген

Разведение плазмы 1:10

Цельная плазма

0.60

+

±

-

+

±

±

±

1.10

+

+

+

+

+

+

+

2.30

+

+

+

+

+

+

+

3.40

+

+

+

+

+

+

+

5.60

+

+

+

+

+

+

+

8.40

-

-

-

-

-

+

+

Условные обозначения: ± - время образования фибринового сгустка зафиксировано не всеми приборами; + - определено время образования фибринового сгустка на разных приборах; - - время образования фибринового сгустка не зафиксировано всеми приборами


Проведенное сравнение существующих тест-систем для определения концентрации фибриногена без предварительной плазмодилюции « Multifibren U » и «МультиТех-Фибриногена» в диапазоне заявленной линейности метода. Для этого использовали контрольные аттестованные плазмы с концентрацией фибриногена   от 0,6 до 8,4 г/л (табл.2). Установлено, что определение КФ в образцах с концентрацией 0,6 г/л, не входящей в диапазон линейности методов, было доступно тест-системе   « Multifibren U» только на коагулометре SТart 4, в то время как использование набора «МультиТех-Фибриноген» позволило надежно определить концентрацию фибриногена   в этом образце на трех приборах.

Таблица 2
Сравнительная характеристика тест-систем по способности определять КФ в широком диапазоне

Концентрация фибриногена, г/л

Аттестованное значение

«Multifibren U»

«МультиТех-Фибриноген»

Start 4

АПГ 2-02

CoaData

KC4D

Start 4

АПГ 2-02

CoaData

KC4D

0.6 (0.3-0.9)

0.87

-

-

-

0.44

-

0.48

0.62

1.1 (0.8-1.4)

1.16

0.86

0.91

0.94

0.90

1.26

1.01

1.27

2.3 (2.0-2.6)

2.63

2.23

2.21

1. 9 8

2.42

2.11

2.63

2.24

3.4 (2.9-3.9)

3.08

3.37

4.01

3.66

3.88

3.17

3.90

3.17

5.6 (5.0-6.2)

6 .07

5.96

6.03

5.59

5 .82

5 .30

5 .90

5.66

8.4 (7.6-9.2)

8.90

7.87

9.05

8.46

8.80

8.30

7.74

8.79

Полученные результаты входят в определенный производителем контрольных материалов диапазон аттестованных значений на всех используемых приборах. Значения концентрации фибриногена в плазмах, полученные на различных коагулометрах с использованием наборов реагентов «МультиТех-Фибриноген» и « Multifibren U » на всей области линейности теста были оценены с помощью корреляционного анализа. Коэффициент корреляции Пирсона составил для разных приборов от   р=0.993 до р=0.998, то есть значимых различий между результатами полученными с использованием этих наборов реагентов, в зависимости от вида коагулометра, не выявлено.

Имеющиеся данные свидетельствуют о высокой информативности НОВОГО набора реагентов «МультиТех-Фибриноген» для определения концентрации фибриногена в плазме крови на разных типах полуавтоматических коагулометров.